L Wnt-3A细胞

一、细胞特性

1. 细胞名称：L Wnt-3A细胞（小鼠皮下结缔组织细胞）
2. 形态：成纤维细胞样，贴壁生长
3. 含量：>1x10⁶ 个/瓶
4. 污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5. 规格：T25瓶或者1mL冻存管包装

二、细胞接收后的处理：
1、贴壁细胞

1. 收到T25方瓶细胞后，请检查是否漏液，如果漏液，请拍照片发给我们（冻存管细胞收到后直接37℃水浴复苏或直接放置于液氮中长期储存）。
2. 请先在显微镜下确认细胞生长状态，去掉封口膜并将T25瓶置于37℃培养约2-3h。
3. 弃去T25瓶中的培养基，换用新鲜的*培养基。
4. 如果细胞长满（90%以上）请及时进行细胞传代。
5. 接到细胞次日，请检查细胞是否污染，若发现污染或疑似污染，请及时与我们取得联系。

2、悬浮细胞

1. 收到细胞后，请检查是否漏液，如果漏液，请拍照片发给我们。
2. 请先在显微镜下确认细胞生长状态，去掉封口膜并将15ml离心管置于37℃培养约2-3h。
3. 1200rpm离心5min，弃去15ml离心管中的培养基，细胞沉淀用新鲜的*培养基重悬并培养。
4. 如果细胞长满（90%以上）请及时进行细胞传代。
5. 接到细胞次日，请检查细胞是否污染，若发现污染或疑似污染，请及时与我们取得联系。

                      
本公司的细胞培养操作规程，供参考
一、L Wnt-3A细胞培养基及培养冻存条件准备：

1. 准备H-DMEM培养基，90%；优质胎牛血清，10%。
2. 培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3. 冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。液氮储存。

二、细胞处理：

1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。

2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

   对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化2-3分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加入3ml此细胞的培养基终止消化。
3. 轻轻吹打后吸出，移入15ml离心管中，在1200RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，加入1mL培养液后吹匀。
4. 移入到事先准备好的含有5ml培养基的T-25培养瓶中或含有14ml培养基的T-75培养瓶中培养。

3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时，先要消化处理并进行细胞计数。消化方法按照细胞传代方法的1-3步骤进行，后的重悬液使用血清。悬浮细胞直接计数后离心，用血清重悬浮，加DMSO至终浓度为10%。加入DMSO后迅速混匀，按每1ml的数量分配到冻存管中。本公司按每个冻存管细胞数目大于1X10⁶个细胞冻存。

注意事项：
1. 收到冻存管细胞后，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。
2. 所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。
3. 细胞用途：仅供科研使用。

发货方式：
复苏后发货：我们复苏细胞后发货，货期一周左右，免运费。（气温较好建议复苏后发货）
冻存发货(干冰运输）：需额外增加干冰运费，选择干冰运输的我们发两管细胞，为了保证客户接种可靠性多发一管。（气温低于0℃须冻存发货）
细胞发货采取专业的运输包装，并选择快捷的运输方式（顺丰速运或其他空运快递）
本公司细胞引种来源：ATCC、DSMZ、ECACC、武大细胞库、上海生化细胞所、中国科学院典型培养物保藏委员会等。

细胞培养常用试剂使用问答
1.谷氨酰胺使用方法是什么？
答：谷氨酰胺在溶液中很不稳定，故4℃下放置1周可分解50%，使用中单独配制，置-20℃冰箱中保存，用前加入培养液中。
2.碳酸氢钠在室温条件存放是否稳定？
答：碳酸氢钠白色粉末，或不透明单斜晶系细微结晶。比重2.159。无臭、味咸，可溶于水，微溶于乙醇。其水溶液因水解而呈微碱性，受热易分解，在65℃以上迅速分解，在270℃时*失去二氧化碳，在干燥空气中无变化，在潮湿空气中缓慢分解。